普通PCR

Taq DNA Polymerase 说明书

产品货号：PC 3015

产品简介：Taq DNA 聚合酶是一种高度持续的 5'→3'DNA 聚合酶，缺乏 3'→5'核酸外切酶活性。它是一个单一多肽链，分子量约为 95kDa。Taq DNA 聚合酶最初是从嗜热真细菌 Thermus aquaticus BM 中分离的，该菌种缺乏 Taq I 限制性内切酶。该酶已克隆至大肠杆菌中。

产品规格： 1 ml

保存条件： -30 ~ -15°C保存，≤0°C运输

适用范围：Taq DNA 聚合酶具有较高的纯度和质量标准，可用于：PCR、RT-PCR、qPCR 以及其他引物延伸反应，例如测序和标记等。Taq DNA 聚合酶没有校对或热启动功能，在+75°C 和 pH 9 下具有最佳活性。

2 × Tap Master Mix 说明书

产品货号：PC 3021

产品简介：本产品是高纯度耐热 DNA 聚合酶，由克隆有 Thermus aquaticus DNAPolymerase 基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到，不含核酸内切酶、核酸外切酶以及细菌 DNA。产品包含 Taq DNA Polymerase、dNTP 以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。本品提供含有电泳缓冲液和染料的版本，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。

产品规格： 1 ml、2ml 、5mL 等，可定制

保存条件： -30 ~ -15°C保存，≤0°C运输

适用范围： 本产品适用于以基因组 DNA、cDNA、Plasmid DNA 以及含尿嘧啶的DNA 为模板的 PCR 反应，亦可用于菌落 PCR 反应。

2 × Tap Master Mix ForPAGE 说明书

产品货号：PC 3117

产品简介：本产品由克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到，不含核酸内切酶、核酸外切酶以及细菌 DNA。产品包含 Taq DNA Polymerase、dNTP 以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。且提供含有电泳缓冲液和染料的版本，附带的 10 × Taq Buffer 经过特殊优化，可在反应结束后直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳。

产品规格： 1 ml

保存条件： -30 ~ -15°C保存，≤0°C运输

适用范围： 本产品是产物适合于聚丙烯酰胺凝胶电泳的 DNA 聚合酶，可用于以基因组 DNA、cDNA、Plasmid DNA 以及含尿嘧啶的 DNA 和菌落为模板的 PCR 反应。

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

产品货号：PC 3089

产品简介：KeyPo DNA Polymerase 是基于 KOD DNA Polymerase 定向进化而来的新一代高保真 DNA 聚合酶，保持了超高的扩增成功率和灵敏度，同 时可以实现 5sec/kb 的快速扩增。本产品对常规模板、高 GC 体系(引物或模板)以及含尿嘧啶模板均具有广泛的适用性。通过添加了在常温下 能够抑制其 5'→3'聚合酶活性和 3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体，本产品可以进行高特异性的热启动 PCR反应。同时，KeyPo Master Mix 是预混型 2 × Mix，只需加入模板和引物即可进行扩增，大大简化了操作过程。

产品规格： 1 ml、2ml 、5mL 等，可定制

保存条件： -30 ~ -15°C保存，≤0°C运输

适用范围： 本产品适用于以基因组 DNA、cDNA、Plasmid DNA 以及含尿嘧啶的DNA 为模板的 PCR 反应。

注意事项：

1、 扩增长度不超过 10 kb;

2、 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板;

3、KeyPo DNA Polymerase 具有较强的校对活性，因此，扩增产物如果需要进行TA 克隆，加 A 之前建议进行 DNA 纯化;

4、 引物设计遵循常规 PCR 引物设计原则，具体建议如下：

(1) 引物 3'端最后一个碱基最好为 G 或者 C;

(2)引物 3'端最后 8 个碱基应避免出现连续错配;

(3) 引物 3'端应避免出现发夹结构;南京思梵生物技术有限公司南京市麒麟科技创新园创研路 266 号人工智能产业园

(4)正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1°C为佳，Tm 值调整至 55 ~ 65°C为佳(引物Tm 值推荐使用 Primer Premier 5 进行计算);

(5)引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物 Tm 值计算;

(6)引物的 GC 含量控制在 40% - 60%之间;

(7)引物 A、G、C、T 整体分布要尽量均匀，避免使用 GC 或者 AT 含量高的区域;

(8)引物内部或者两条引物之间避免有 5 个碱基以上的互补序列，两条引物的 3'端避免有3 个碱基以上的互补序列;

(9)引物设计完毕请使用 NCBI BLAST 功能检索引物特异性，以避免产生非特异性扩增。

实验流程 ：

1、反应体系

所有操作请在冰上进行，PCR 相关组分解冻后请充分混匀，用完之后请及时放回-20°C保存

组分 Nuclease-free ddHzO 2xKeyPo master mix ( Dye Plus) 上游引物（ 10μM> 下游引物（ 10μM> 模版

体积 up to 50μL 25μL 2μL 2μL 1-5μL(不超过PCR反应总体系体积1/10>

2、反应程序

温度 98℃ Tm 注 72℃

时间 10 Sec 5 Sec 5 Sec/kb

循环数 25-38 cycles

注：请根据引物 Tm 值设置退火温度，如引物 Tm 值≥72°C，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤(两步法 PCR)。如果需要，推荐通过建立温度梯度寻找引 物与模板结合的最适温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性，如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度。